Produkty

Fosfatazy białkowe serynowo/treoninowe zostały opisane w wielu bakteriach chorobotwórczych jako niezbędne enzymy zaangażowane w szlaki przekazywania sygnału zależne od fosforylacji i często związane z wirulencją tych organizmów.Inspekcja genomu Mycoplasma synoviae wykazała obecność genu (prpC) kodującego domniemaną fosfatazę białkową z podrodziny fosfatazy białkowej 2C (PP2C).Tutaj przedstawiamy pełną charakterystykę biochemiczną fosfatazy M. synoviae (PrpC) i szczególną rolę jonów metali w relacji struktura-funkcja tego enzymu.Analiza sekwencji aminokwasowej PrpC ujawniła, że ​​wszystkie reszty zaangażowane w dwujądrowe centrum metalu i domniemane reszty koordynujące trzeci jon metalu, konserwowane w fosfatazach PP2C, są obecne w PrpC.PrpC jest monomerycznym białkiem zdolnym do defosforylacji substratów fosfo z zależnością od jonów Mn(2+).Analiza stabilności termicznej wykazała stabilność enzymu w łagodnych temperaturach oraz wpływ jonów Mn(2+) na tę właściwość.Analiza spektrometrii mas sugeruje, że trzy jony metali wiążą się z PrpC, z których dwa mają pozorną stałą wysokiego powinowactwa.Analiza mutacji przypuszczalnych reszt koordynujących trzeci metal, Asp122 i Arg164, ujawniła, że ​​te warianty wykazywały słabsze wiązanie jonów manganu i że obie mutacje wpłynęły na aktywność fosfatazy PrpC.Zgodnie z tymi wynikami, PrpC jest zależnym od metalu członkiem fosfatazy białkowej o ulepszonej stabilności w formie holo i Asp122, prawdopodobnie zaangażowanym w trzecie miejsce wiązania metalu, niezbędne dla aktywności katalitycznej.