Produkty

1. Metody profilowania metabolitów są ważnymi narzędziami do pomiaru puli metabolitów w systemach biologicznych.Podczas gdy większość metod profilowania metabolitów podaje względne intensywności lub opiera się na kilku wewnętrznych standardach reprezentujących wszystkie metabolity, ostatecznym wymogiem ilościowego opisu puli metabolitów w komórkach biologicznych i płynach jest określenie stężenia bezwzględnego.Podajemy tutaj wysokowydajną i czułą chromatografię gazową / tandemową spektrometrię mas (GC / MS / MS) ukierunkowaną metodę profilowania metabolitów, umożliwiającą bezwzględną ocenę ilościową wszystkich wykrytych metabolitów.Metoda opiera się na derywatyzacji chloromrówczanem metylu i oznaczaniu ilościowym przez wzbogacanie próbek standardami metabolitów oddzielnie derywatyzowanymi deuterowanymi odczynnikami do derywatyzacji.Tradycyjna jonizacja uderzeniowa elektronów jest zastępowana dodatnią jonizacją chemiczną, ponieważ ta ostatnia w znacznie większym stopniu zachowuje jon cząsteczkowy i inne fragmenty o dużej masie cząsteczkowej.Ułatwiło to wybór unikalnych przejść MS/MS spośród wielu współeluujących metabolitów.Obecnie nowa metoda GC/MS/MS obejmuje 67 powszechnych metabolitów pierwotnych, z których większość należy do grupy aminokwasów i nieaminokwasów organicznych.Pokazujemy przydatność metody na próbkach moczu i surowicy.Metoda jest znaczącym ulepszeniem obecnej metodologii ilościowego profilowania metabolitów aminokwasów i nieaminokwasów organicznych metodą GC/MS.

2,24S-Hydroksycholesterol (24OHC) i 27-hydroksycholesterol (27OHC) to dwa strukturalnie podobne oksysterole różnego pochodzenia – pierwszy prawie wyłącznie powstaje w mózgu, a drugi w mniejszym stopniu w mózgu niż w większości innych narządów.HIPOTEZA DO SPRAWDZENIA: Uszkodzenie neuronów i/lub demielinizacja powoduje zwiększony przepływ 24OHC z mózgu do płynu mózgowo-rdzeniowego (PMR), podczas gdy uszkodzenie bariery krew-mózg powoduje zwiększony przepływ 27OHC z krążenia do płynu mózgowo-rdzeniowego. Spektrometrię wykorzystano do oznaczenia dwóch oksysteroli w płynie mózgowo-rdzeniowym i osoczu od ponad 250 pacjentów z różnymi chorobami neurologicznymi i geriatrycznymi. Różne choroby miały znacznie większy wpływ na poziomy dwóch oksysteroli w płynie mózgowo-rdzeniowym niż poziomy w osoczu.Pacjenci z aktywnymi chorobami demielinizacyjnymi mieli podwyższone poziomy 24OHC w płynie mózgowo-rdzeniowym przy stosunkowo wysokim stosunku 24OHC/27OHC.Pacjenci z zapaleniem opon mózgowych na ogół mieli wysoki poziom obu steroidów przy niskim stosunku 24OHC/27OHC.Pacjenci z chorobą Alzheimera mieli nieznacznie podwyższone poziomy 24OHC w płynie mózgowo-rdzeniowym przy mniejszym wzroście 27OHC.Pacjenci ze stwardnieniem rozsianym mieli tendencję do posiadania wyższych poziomów 24OHC podczas aktywnych okresów z wysokim stosunkiem 24OHC/27OHC. Pomiary dwóch oksysteroli w płynie mózgowo-rdzeniowym i osoczu mogą znacząco wzbogacić istniejące biochemiczne metody oceny chorób neurologicznych.