Produkty

Jednym z czynników uniemożliwiających kliniczne zastosowanie medycyny regeneracyjnej w chorobach zwyrodnieniowych chrząstki jest odpowiednie źródło komórek.Chondrocyty, jedyny typ komórek chrząstki, hodowane in vitro w warunkach hodowlanych w celu zwiększenia liczby komórek, tracą swój fenotyp wraz ze zdolnością do generowania szklistej tkanki chrzęstnej.W tym badaniu ustaliliśmy, że trójwymiarowy (3D) system hodowli wolny od surowicy i czynnika wzrostu przywraca zdolność pasażowanych chondrocytów do tworzenia tkanki chrzęstnej in vitro, w procesie obejmującym sox9. Bydlęce chondrocyty stawowe pasażowano dwukrotnie do pozwolić na ekspansję liczby komórek (P2) i hodować z dużą gęstością na błonach 3D pokrytych kolagenem typu II w pożywce o wysokiej zawartości glukozy uzupełnionej insuliną i deksametazonem (SF3D).Komórki scharakteryzowano po ekspansji jednowarstwowej i po hodowli 3D za pomocą cytometrii przepływowej, ekspresji genów i histologii.Scharakteryzowano wczesne zmiany w szlakach transdukcji sygnału podczas ponownego różnicowania. Komórki P2 wykazywały progenitorowy profil antygenowy 99% CD44(+) i 40% CD105(+) oraz profil ekspresji genów sugerujący komórki międzystrefowe.P2 w SF3D eksprymowało geny chondrogenne i nagromadzoną macierz zewnątrzkomórkową.Zmniejszenie poziomu receptora insuliny (IR) za pomocą HNMPA-(AM3) lub szlaku kinazy PI-3/AKT (aktywowanego przez leczenie insuliną) za pomocą wortmaniny hamowało syntezę kolagenu.HNMPA-(AM3) zmniejsza ekspresję genów Col2, Col11 i IR, a także Sox6 i -9.Analizy koimmunoprecypitacji i immunoprecypitacji chromatyny komórek traktowanych HNMPA-(AM3) wykazały wiązanie koaktywatorów Sox6 i Med12 z Sox9, ale zmniejszone wiązanie Sox9-Col2a1. Opisujemy nową metodę hodowli, która pozwala na zwiększenie liczby chondrocytów i promuje tworzenie tkanki chrzęstnej podobnej do hialiny częściowo przez pośredniczone przez insulinę wiązanie Sox9-Col2a1.Przydatność tkanki wytworzonej w ten sposób do naprawy stawów należy zbadać in vivo.