Produkty

Jądrowa akumulacja zmutowanej postaci białka jądrowego Lamin-A, zwanej Progeryną (PG) lub Lamin AΔ50, występuje w zespole Hutchinsona-Gilforda Progeria (HGPS) lub Progeria, chorobie przyspieszonego starzenia.Jednym z głównych objawów tego zaburzenia genetycznego jest utrata podskórnej tkanki tłuszczowej spowodowana dramatyczną lipodystrofią. Wywołaliśmy stabilnie ekspresję ludzkiego PG i GFP — białka zielonej fluorescencji — jako kontroli w komórkach 3T3L1, stosując system lentiwirusowy do badania wpływ ekspresji PG na zdolność różnicowania tej linii komórkowej, jeden z najczęściej stosowanych modeli adipogennych.Przeprowadzono proteomikę ilościową (iTRAQ) w celu zbadania wpływu akumulacji PG.Kilka z modulowanych białek zostało zweryfikowanych za pomocą immunoblottingu i PCR w czasie rzeczywistym.Funkcję mitochondriów analizowano mierząc a) podstawową aktywność mitochondriów, b) wytwarzanie anionów nadtlenkowych oraz c) indywidualną wydajność różnych kompleksów łańcucha oddechowego. Stwierdziliśmy, że nadekspresja PG przez dostarczanie genów lentiwirusowych prowadzi do zmniejszenie tempa proliferacji i defekty zdolności adipogennych w porównaniu z kontrolą.Ilościowa analiza proteomiczna wykazała 181 białek istotnie (p <0,05) modulowanych w preadipocytach eksprymujących PG.Funkcja mitochondriów jest upośledzona w komórkach wykazujących ekspresję PG.W szczególności wykryliśmy wzrost aktywności kompleksu I i nadprodukcję anionu ponadtlenkowego.Inkubacja ze zmiataczami reaktywnych form tlenu (ROS) prowadzi do zmniejszenia proteolizy autofagicznej, co ujawnia stosunek LC3-II/LC3-I. Ekspresja PG w komórkach 3T3L1 sprzyja zmianom w kilku procesach biologicznych, w tym w strukturze cytoszkieletu, metabolizmie lipidów, wapniu regulacja, translacja, fałdowanie białek i wytwarzanie energii przez mitochondria.Nasze dane wzmacniają wkład akumulacji ROS w fenotyp przedwczesnego starzenia i ustalają związek między dysfunkcją mitochondriów a utratą proteostazy w HGPS.