Aktualności

Wokół nas jest wielu niedocenionych bohaterów, którzy wydają się zwyczajni, ale w rzeczywistości po cichu wiele nam dają.Proteinaza K jest „niedocenionym bohaterem” w branży diagnostyki molekularnej, chociaż w porównaniu z „wielkimi i potężnymi” w branży proteinaza K jest tak mało ważna, że ​​od dawna przeoczyliśmy jej znaczenie.Wraz z wybuchem nowej epidemii korony zapotrzebowanie na proteinazę K poszybowało w górę, a podaż w kraju i za granicą jest daleko w tyle za konsumpcją i wszyscy nagle zdali sobie sprawę, że proteinaza K jest tak ważna.
Jakie jest zastosowanie proteinazy K
Proteinaza K jest proteazą serynową o aktywności enzymu proteolitycznego i może zachować aktywność w szerokim zakresie środowisk (pH (4-12,5), bufor o wysokiej zawartości soli, wysoka temperatura 70°C itp.).Ponadto, aktywność proteinazy K nie jest hamowana przez SDS, mocznik, EDTA, chlorowodorek guanidyny, izotiocyjanian guanidyny itp., a pewna ilość detergentu może również nasilać aktywność proteinazy K. W lecznictwie (dezynfekcja wirusów i drobnoustrojów) ), żywność (zmiękczanie mięsa), skóra (zmiękczanie włosów), winiarstwo (klarowanie alkoholu), preparatyka aminokwasów (zdegradowane pióra), ekstrakcja kwasów nukleinowych, hybrydyzacja in situ itp., proteinaza K Istnieją zastosowania.Najczęściej stosowanym zastosowaniem jest ekstrakcja kwasu nukleinowego.
Proteinaza K może enzymolizować wszystkie rodzaje białek w próbce, w tym histony, które są ściśle związane z kwasami nukleinowymi, dzięki czemu kwasy nukleinowe mogą zostać uwolnione z próbki i uwolnione do ekstraktu, ułatwiając kolejny etap ekstrakcji i oczyszczania.W wykrywaniu wirusowego kwasu nukleinowego proteinaza K jest jednym z ważnych składników roztworu do pobierania próbek wirusa.Proteinaza K może pękać i dezaktywować białko otoczki wirusa, co jest bezpieczniejsze na etapie transportu i wykrywania;dodatkowo proteinaza K może również degradować RNazę, zapobiega degradacji wirusowego RNA i ułatwia wykrywanie kwasów nukleinowych.
Nocna sława proteinazy K
Czy to w dziedzinie badań naukowych, czy w dziedzinie IVD, ekstrakcja kwasu nukleinowego jest najbardziej podstawowym eksperymentem, więc proteinaza K zawsze była bardzo ważnym istnieniem.Jednak w przeszłości proteinaza K była znacznie mniej znana niż jej rola.W dużej mierze wynikało to z tego, że relacja podaży i popytu proteinazy K była bardzo stabilna.Niewiele osób pomyślałoby, że podaż proteinazy K będzie problemem.
Wraz z wybuchem nowej epidemii korony gwałtownie wzrosło zapotrzebowanie na testy kwasu nukleinowego.Pod koniec czerwca 2020 r. Chiny przeprowadziły prawie 90 milionów nowych testów koron, a liczba ta jest jeszcze bardziej niepokojąca w skali globalnej.W eksperymentach z ekstrakcją kwasu nukleinowego, robocze stężenie proteinazy K wynosi około 50-200 μg/ml.Ogólnie potrzeba około 100 μg proteinazy K, aby wyekstrahować próbkę kwasu nukleinowego.W praktyce, w celu zwiększenia wydajności ekstrakcji kwasów nukleinowych, często stosuje się Proteinazę K w zwiększonej ilości.Wykrywanie kwasu nukleinowego nowego koronawirusa przyniosło duże zapotrzebowanie na proteinazę K.Pierwotna równowaga podaży i popytu proteinazy K została szybko zerwana, a proteinaza K z dnia na dzień stała się ważnym materiałem do zapobiegania epidemii.
Trudności w produkcji proteinazy K
Choć wraz z rozwojem epidemii dostrzeżono istotną wartość proteinazy K, to żenujące jest to, że ze względu na zbyt niski klucz proteinazy K niewiele krajowych firm zaangażowało się w produkcję proteinazy K. Kiedy ludzie chcą rozpocząć produkcję proteinazy K Podczas procesu produkcyjnego odkryto, że proteinaza K jest wyjątkowo wyjątkowym białkiem.Zwiększenie zdolności produkcyjnej proteinazy K w krótkim czasie jest niezwykle trudne.
Produkcja proteinazy K na dużą skalę napotyka następujące trudności
1. Niska ekspresja
Proteinaza K może nieswoiście rozkładać większość białek i powodować poważną toksyczność dla ekspresyjnej komórki gospodarza.Dlatego poziom ekspresji proteinazy K jest na ogół bardzo niski.Przeszukiwanie systemów ekspresyjnych i szczepów, które wykazują wysoką ekspresję proteinazy K, na ogół wymaga dłuższego cyklu.
2. Pozostałości pigmentów i kwasów nukleinowych
Fermentacja na dużą skalę wprowadza dużą ilość pozostałości pigmentu i kwasu nukleinowego gospodarza.Trudno jest usunąć te zanieczyszczenia za pomocą prostego procesu oczyszczania, a złożone oczyszczanie zwiększa koszty i zmniejsza stopień odzysku.
3. Niestabilność
Proteinaza K nie jest wystarczająco stabilna, może ulegać enzymolizie i trudno ją stabilnie przechowywać przez długi czas w temperaturze 37°C bez środka ochronnego.
4. Łatwo wytrąca się
Przygotowując liofilizowany proszek proteinazy K, aby zapewnić dużą zawartość substancji stałych proteinazy K w liofilizowanym proszku, konieczne jest dodanie liofilizowanego środka ochronnego w wysokim stężeniu, ale gdy stężenie proteinazy K osiąga 20mg/ml i więcej, jest to łatwe Agregacja tworzy osad, który bardzo utrudnia liofilizację proteinazy K o wysokiej zawartości części stałych.
5. Duża inwestycja
Proteinaza K ma silną aktywność proteazy i może hydrolizować inne proteazy w laboratorium.Dlatego proteinaza K wymaga wyspecjalizowanych obszarów produkcyjnych, sprzętu i personelu do badań i rozwoju oraz produkcji.
Roztwór proteinazy K firmy XD BIOCHEM
XD BIOCHEM has a mature protein expression and purification platform, and has rich experience in the expression and purification of recombinant proteins and optimization of production processes. Through the rapid formation of a research and development team, the large-scale production process of proteinase K has been overcome. The monthly output of freeze-dried powder is more than 30 KG. The product has stable performance, high enzyme specific activity, and no host cytochrome and nucleic acid residues. Welcome to contact XD BIOCHEM Obtain a trial package (E-mail: sales@xdbiochem.com Tel: +86 513 81163739).
Rozwiązania techniczne XD BIOCHEM obejmują
Stosując integrację plazmidu z wieloma kopiami, selekcjonuje się szczepy o wysokiej ekspresji z poziomem ekspresji 8 g/l, co przezwycięża problem niskiego poziomu ekspresji proteinazy K;
Dzięki ustanowieniu wieloetapowego procesu oczyszczania pozostałości cytochromu gospodarza i kwasu nukleinowego proteinazy K zostały z powodzeniem usunięte poniżej wartości standardowej;
Poprzez wysokowydajne badania przesiewowe preparatów buforów ochronnych wybrano bufor, który może stabilnie przechowywać proteinazę K w temperaturze 37°C;
Bufory przesiewowe rozwiązują problem polegający na tym, że proteinaza K łatwo się agreguje i wytrąca w wysokich stężeniach, i kładzie podwaliny pod liofilizację proteinazy K o wysokiej zawartości części stałych.

XD BIOCHEM próbka proteinazy K

Test stabilności XD BIOCHEM proteinazy K: nie będzie znaczącej zmiany aktywności po 80 dniach w temperaturze pokojowej

Test stabilności XD BIOCHEM proteinazy K: nie będzie znaczącej zmiany aktywności po 80 dniach w temperaturze pokojowej

Porównanie efektu ekstrakcji kwasów nukleinowych przez proteinazę K XD BIOCHEM i produkty konkurencyjne.W procesie ekstrakcji kwasów nukleinowych stosuje się odpowiednio XD BIOCHEM oraz kompetycyjną proteinazę K.Wydajność ekstrakcji proteinazy K XD BIOCHEM jest wyższa, a wartość Ct docelowego genu jest niższa.