Produkty

W pracy opisano prostą i wydajną metodę wykorzystującą wysokosprawną chromatografię cieczową (HPLC) sprzężoną z detekcją fluorescencyjną do określenia parametrów kinetycznych wychwytu glutaminianu w tkance nerwowej.Tkankę siatkówki uzyskaną od 7-dniowych piskląt inkubowano ze znanymi stężeniami glutaminianu (50-2000 μM) przez 10 minut i zmierzono poziomy neuroprzekaźnika derywatyzowanego aldehydem o-ftaldehydowym (OPA) w pożywce inkubacyjnej.Oceniając różnicę między początkowym i końcowym stężeniem glutaminianu w pożywce, scharakteryzowano mechanizm wychwytu nasycającego (K(m)=8,2 i V(max)=9,8 nmol/mg białka/min).Miara ta była w dużej mierze zależna od sodu i temperatury, silnie potwierdzając, że mechanizm spadku stężenia jest rzeczywiście wychwytywany przez transportery o wysokim powinowactwie.Co więcej, nasze wyniki wykazały również, że chlorek cynku (inhibitor transporterów glutaminianu/asparaginianu) wywołał zależny od stężenia spadek wychwytu glutaminianu, co wskazuje na specyfikę naszej metodologii.Ogólnie rzecz biorąc, niniejsza praca charakteryzuje alternatywną metodologię oceny wychwytu glutaminianu w tkance nerwowej za pomocą HPLC.Podejście to może być ważnym narzędziem do badań związanych z charakteryzacją drobnych zmian w transporcie glutaminianu związanych z uszkodzeniem ośrodkowego układu nerwowego.