Produkty

Topologię błony domeny kanału kolicyny E1 badano za pomocą transferu energii rezonansu fluorescencji (FRET).FRET obejmował genetycznie zakodowany aminokwas fluorescencyjny (kumarynę) jako donora i selektywnie znakowaną resztę cysteiny związaną z DABMI (4-(dimetyloamino)fenyloazofenylo-4'-maleimidem) jako akceptorem FRET.Fluorescencyjna reszta kumaryny została włączona do białka poprzez ortogonalną parę syntetazy tRNA/aminoacylo-tRNA, która umożliwiła selektywne włączenie do dowolnego miejsca w domenie kanału kolicyny.Każdy wariant zawierał mutację stop (TAG) dla włączenia kumaryny i mutację cysteiny (TGT) dla przyłączenia DABMI.Sześć odległości między helisami w helisach 1-6 określono za pomocą analizy FRET zarówno dla stanu rozpuszczalnego, jak i związanego z błoną.Dane FRET wykazały duże zmiany w odległościach między helisami między helisami 3-6 po asocjacji z błoną, dostarczając nowych informacji na temat struktury domeny kanału związanej z błoną.Ogólnie rzecz biorąc, wydajność międzyhelikalna kumaryny-DABMI FRET zmniejszyła się po związaniu z błoną, opierając się na modelu parasolowym dla kanału kolicyny.Wstępny model stanu zamkniętego domeny kanału został opracowany na podstawie aktualnych i wcześniej opublikowanych danych FRET.Model sugeruje koliste ułożenie helis 1-7 w kierunku zgodnym z ruchem wskazówek zegara od strony zewnątrzkomórkowej i międzyfazowe połączenie helis 1, 6, 7 i 10 wokół centralnej transbłonowej spinki do włosów utworzonej przez helisy 8 i 9.