Produkty

Podobnie jak inne wirusy RNA o dodatniej nici, tombuswirusy są replikowane przez wirusowy kompleks replikazy związany z błoną (VRC).VRC składa się z kodowanej przez wirusa p92 polimerazy RNA zależnej od RNA (RdRp), wirusa opiekuńczego p33 RNA i kilku dokooptowanych białek gospodarza.Aby po translacji stać się funkcjonalnym RdRp, białko replikacyjne p92 powinno zostać włączone do VRC, a następnie aktywowane.Wcześniej wykazaliśmy w teście opartym na bezkomórkowym ekstrakcie drożdżowym, że aktywacja RdRp wirusa krzaczastego pomidora (TBSV) wymaga rozpuszczalnego czynnika (ów) gospodarza.W tym artykule identyfikujemy komórkowe białko szoku cieplnego 70 (Hsp70) jako dokooptowany czynnik gospodarza wymagany do aktywacji skróconego na N-końcu rekombinowanego TBSV RdRp.Ponadto, oparte na małych cząsteczkach blokowanie funkcji Hsp70 hamuje syntezę RNA przez tombuswirusa RdRp in vitro.Ponadto pokazujemy, że obojętne fosfolipidy, a mianowicie fosfatydyloetanoloamina (PE) i fosfatydylocholina (PC), zwiększają aktywację RdRp in vitro.Natomiast fosfatydyloglicerol (PG) wykazuje silne i dominujące działanie hamujące na aktywację RdRp in vitro.Wykazaliśmy również, że PE i PC stymulują interakcję RdRp-wirusowy plus-niciowy RNA [(+)RNA], podczas gdy PG hamuje wiązanie wirusowego RNA z RdRp.Opierając się na stymulujących i hamujących rolach różnych fosfolipidów w aktywacji RdRp wirusa tombus, proponujemy, aby skład lipidów docelowych błon subkomórkowych mógł być wykorzystywany przez tombuswirusy do regulacji nowego składania VRC w trakcie infekcji. Polimeraza RNA zależna od RNA kodowana przez wirusy (RdRp), który jest odpowiedzialny za syntezę wirusowego potomstwa RNA w zakażonych komórkach kilku wirusów RNA o dodatniej nici, jest początkowo nieaktywny.Ta strategia prawdopodobnie pozwoli uniknąć syntezy wirusowego RNA w cytosolu, która szybko doprowadziłaby do indukcji komórkowych odpowiedzi przeciwwirusowych wyzwalanych przez RNA.Podczas składania kompleksu replikazy związanej z błoną, wirusowy RdRp zostaje aktywowany w wyniku nie do końca poznanego procesu, który sprawia, że ​​RdRp jest zdolny do syntezy RNA.Używając TBSV RdRp, pokazujemy, że kooptowany komórkowy opiekun Hsp70 i neutralne fosfolipidy ułatwiają aktywację RdRp in vitro.W przeciwieństwie do tego, fosfatydyloglicerol (PG) ma dominujący wpływ hamujący na aktywację RdRp in vitro i interakcję RdRp-wirusowy RNA, co sugeruje, że błoniasta mikrodomena otaczająca RdRp znacznie wpływa na jego zdolność do syntezy RNA.Zatem aktywacja wirusowego RdRp prawdopodobnie zależy od wielu składników gospodarza w zakażonych komórkach.