Produkty

2,3-dioksygenaza indoloaminy (IDO1) i 2,3-dioksygenaza tryptofanu (TDO) to dwa strukturalnie różne enzymy, które mają różne rozmieszczenie w tkankach i role fizjologiczne, ale oba katalizują konwersję tryptofanu do N-formylokinureniny (NFK).IDO1 został klinicznie potwierdzony jako drobnocząsteczkowy cel leku na raka, podczas gdy badania przedkliniczne wskazują, że TDO może być celem immunoterapii raka i chorób neurodegeneracyjnych.Opracowaliśmy wysokowydajny test przesiewowy dla IDO1 i TDO w oparciu o nową sondę chemiczną NFK Green, która reaguje specyficznie z NFK, tworząc zieloną cząsteczkę fluorescencyjną o długości fali wzbudzenia 400 nm i długości fali emisji 510 nm.Przedstawiamy pierwsze bezpośrednie porównanie szeregu opublikowanych inhibitorów IDO1 i TDO i ujawniamy, że przedkliniczny inhibitor IDO1, Związek 51, wykazuje znaczącą reaktywność krzyżową z TDO, podczas gdy względna selektywność innych opublikowanych inhibitorów została potwierdzona.Przydatność testów do wysokowydajnych badań przesiewowych została wykazana poprzez przeszukanie biblioteki 87 000 substancji chemicznych w formacie 384- lub 1536-dołkowym.Na koniec wykazaliśmy, że test można również wykorzystać do pomiaru zdolności komórek do metabolizowania tryptofanu oraz do pomiaru siły komórkowej inhibitorów IDO1 i TDO.