Produkty

Beta-D-2'-deoksy-2'-fluoro-2'-C-metylocytydyna (PSI-6130) jest silnym specyficznym inhibitorem syntezy RNA wirusa zapalenia wątroby typu C (HCV) w komórkach replikonu Huh-7.Aby zahamować polimerazę RNA HCV NS5B, PSI-6130 musi zostać ufosforylowany do postaci 5'-trifosforanu.Badano fosforylację PSI-6130 i hamowanie HCV NS5B.Fosforylację PSI-6130 przez rekombinowaną ludzką kinazę 2'-dezoksycytydynową (dCK) i kinazę urydynowo-cytydynową 1 (UCK-1) mierzono stosując sprzężoną reakcję spektrofotometryczną.Wykazano, że PSI-6130 jest substratem dla oczyszczonej dCK, z Km 81 mikroM i kcat 0,007 s-1, ale nie jest substratem dla UCK-1.Monofosforan PSI-6130 (PSI-6130-MP) był skutecznie fosforylowany do difosforanu, a następnie do trifosforanu, odpowiednio przez rekombinowaną ludzką kinazę UMP-CMP i kinazę difosforanu nukleozydu.Zbadano hamowanie polimeraz RNA HCV NS5B typu dzikiego i zmutowanych (S282T).Stała hamowania w stanie ustalonym (Ki) dla trifosforanu PSI-6130 (PSI-6130-TP) z enzymem typu dzikiego wynosiła 4,3 mikroM.Podobne wyniki otrzymano z trifosforanem 2'-C-metyladenozyny (Ki = 1,5 mikroM) i trifosforanem 2'-C-metylocytydyny (Ki = 1,6 mikroM).NS5B z mutacją S282T, o której wiadomo, że nadaje oporność na 2'-C-metyladenozynę, był hamowany przez PSI-6130-TP równie skutecznie jak typ dziki.Włączenie PSI-6130-MP do RNA katalizowanego przez oczyszczoną polimerazę RNA NS5B spowodowało terminację łańcucha.