Produkty

Lepsze wykorzystanie azotu przez bydło jest ważne dla zapewnienia zrównoważonej produkcji bydła.Ponieważ puryny i pirymidyny (PP) stanowią znaczną część azotu żwacza, niezbędne jest lepsze zrozumienie wchłaniania i pośredniego metabolizmu PP.W pracy opisano opracowanie i walidację czułej i swoistej metody jednoczesnego oznaczania 20 puryn (adenina, guanina, guanozyna, inozyna, 2'-deoksyguanozyna, 2'-deoksyinozyna, ksantyna, hipoksantyna), pirymidyn (cytozyna, tymina, uracyl, cytydyna, urydyna, tymidyna, 2'-dezoksyurydyna) oraz produkty ich rozkładu (kwas moczowy, alantoina, β-alanina, kwas β-ureidopropionowy, kwas β-aminoizomasłowy) w osoczu krwi krów mlecznych.Technikę opartą na wysokosprawnej chromatografii cieczowej w połączeniu z tandemową spektrometrią mas z jonizacją przez elektrorozpylanie (LC-MS/MS) połączono z indywidualnymi wzorcami kalibracyjnymi dopasowanymi do matrycy i stabilnymi izotopowo znakowanymi związkami odniesienia.Analiza ilościowa została poprzedzona nową procedurą obróbki wstępnej, składającą się z wytrącania etanolem, filtracji, odparowania i rekonstytucji.Zbadano parametry separacji i detekcji podczas analizy LC-MS/MS.Potwierdzono, że użycie modelu kalibracji logarytmicznej zamiast liniowego modelu kalibracji skutkowało niższym CV%, a test braku dopasowania wykazał zadowalającą regresję liniową.Metoda obejmuje zakresy stężeń poszczególnych metabolitów zgodnie z rzeczywistymi próbkami, np. guanina: 0,10-5,0 μmol/L, alantoina: 120-500 μmol/L.CV% dla wybranych zakresów oznaczania ilościowego wynosiło poniżej 25%.Metoda charakteryzuje się dobrą powtarzalnością (CV%≤25%) i precyzją pośrednią (CV%≤25%) oraz doskonałym odzyskiem (91-107%).Wszystkie metabolity wykazywały dobrą stabilność długoterminową i dobrą stabilność w obrębie serii (CV%≤10%).W osoczu, moczu i mleku obserwowano różne stopnie bezwzględnych efektów matrycowych.Określenie względnych efektów macierzowych wykazało, że metoda jest odpowiednia dla prawie wszystkich badanych metabolitów PP w osoczu pobranym z tętnicy i żyły wrotnej wątroby, wątroby i śledziony oraz, z nielicznymi wyjątkami, także dla innych gatunków, takich jak kury, świnie, norka, człowiek i szczur.