Produkty

W progresji orbitopatii Gravesa (GO) wykazano różnicowanie fibroblastów oczodołu w dojrzałe adipocyty, a następnie gromadzenie się tkanki tłuszczowej.Autofagia bierze udział w adipogenezie, ale niewiele wiadomo na temat roli autofagii w inicjacji i progresji GO.Celem tego badania jest zbadanie roli autofagii w patogenezie GO. Przeanalizowano eksplantaty tkanki tłuszczowej/łącznej oczodołu od pacjentów z GO i od osób zdrowych, a także izolowane fibroblasty oczodołu.Adipogenezę indukowano przy użyciu pożywki różnicującej z nadtlenkiem wodoru lub bez, a autofagią manipulowano za pomocą krótkiego RNA o strukturze spinki do włosów (shRNA) ukierunkowanego na bafilomycynę A1 i Atg5.Autofagosomy zidentyfikowano za pomocą mikroskopii elektronowej.Ekspresję genów związanych z autofagią i czynniki transkrypcyjne związane z adipogenezą analizowano za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy z odwrotną transkrypcją w czasie rzeczywistym i / lub analizy Western blot.Akumulacja kropelek lipidów była badana przez barwienie Oil Red O. Autofagiczne wakuole były bardziej obfite w komórkach GO niż w komórkach non-GO (p<0,05).Ekspresja genów związanych z autofagią była znacznie wyższa odpowiednio w tkankach i komórkach GO niż w ich odpowiednikach innych niż GO.Interleukina-1β zwiększała poziom białka LC3-II, p62 i Atg7 w komórkach GO.Akumulacja autofagosomu została wykazana w 4 dniu adipogenezy i zmniejszyła się do dnia 10, wraz z tworzeniem się kropelek lipidów.Ekspresja białek LC3 i p62 wzrosła w ciągu 48 godzin od różnicowania i stopniowo malała od 4 do 10 dnia. Leczenie bafilomycyną A1 i knockdown Atg5 przez shRNA hamowało gromadzenie się kropelek lipidów i tłumiło ekspresję markerów adipogennych. Autofagia była zwiększona w tkance i komórkach GO w porównaniu z tkanki i komórki inne niż GO, co sugeruje, że autofagia odgrywa rolę w patogenezie GO.Manipulacja autofagią może być celem terapeutycznym dla GO.